Xem Nhiều 2/2023 #️ Hô Biến Pcr Thành Real # Top 11 Trend | Sansangdethanhcong.com

Xem Nhiều 2/2023 # Hô Biến Pcr Thành Real # Top 11 Trend

Cập nhật thông tin chi tiết về Hô Biến Pcr Thành Real mới nhất trên website Sansangdethanhcong.com. Hy vọng nội dung bài viết sẽ đáp ứng được nhu cầu của bạn, chúng tôi sẽ thường xuyên cập nhật mới nội dung để bạn nhận được thông tin nhanh chóng và chính xác nhất.

Trong bài viết hôm nay, tôi sẽ mổ xẻ từ “ĐƯỢC” trên, nghĩa là những yếu tố bạn cần có để chuyển đổi nhanh chóng một phản ứng PCR thông thường thành Real-time PCR trong vòng…7 nốt nhạc! 🙂 

Cách sử dụng EvaGreen cũng khá đơn giản. Ống EvaGreen bạn mua về thường có nồng độ cao, 100X. Bạn chỉ việc hút 1 lượng thể tích nhỏ bổ sung vào phản ứng PCR của mình sao cho nồng độ cuối của EvaGreen vào khoảng 0.5X – 1X là được. Ví dụ, nếu tổng thể tích phản ứng PCR của bạn (tính luôn lượng DNA cho vào) là 25 μl, bạn chỉ cần hút 0,25 μl EvaGreen 100X cho vào ống phản ứng để được nồng độ cuối là 1X.

Vậy thì, tại sao bạn phải chạy thêm bước phân tích Melting Curve này? Câu trả lời là: “Để biết tín hiệu huỳnh quang tạo ra từ phản ứng là do sản phẩm PCR đặc hiệu chứ không phải do primer dimer gây ra”.

Theo nguyên tắc, EvaGreen sẽ bám vào bất kỳ phân tử DNA mạch đôi nào có mặt trong phản ứng và phát ra huỳnh quang. Thế nên, cho dù phản ứng của bạn không hề có sản phẩm PCR đặc hiệu mà chỉ cho các primer dimer thì bạn vẫn sẽ thu được đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang tăng vọt vào những chu kỳ 35-40, và dẫn đến kết luận DƯƠNG TÍNH GIẢ! Để tránh trường hợp này xảy ra, bạn phải dựa trên kết quả phân tích Tm của tất cả các sản phẩm DNA mạch đôi có trong phản ứng. Tm của primer dimer thường rất thấp, khoảng 60-70oC, rất dễ phân biệt với Tm của sản phẩm PCR đặc hiệu, dao động trong khoảng 75-90oC.

Thứ tư, phải sử dụng tube 0,2 ml phù hợp với máy Real-time PCR. Vì đại đa số các máy Real-time PCR hiện có trên thị trường Việt Nam thường ghi nhận tín hiệu huỳnh quang xuyên qua nắp tube chứa phản ứng, nên bạn phải chắc chắn sử dụng đúng loại tube 0,2ml có nắp trong suốt (optical cap) chuyên dụng cho Real-time PCR.

Cuối cùng, ngoài lề một chút, tôi xin chia sẻ rằng với Real-time PCR sử dụng EvaGreen hay SYBR Green, bạn có thể nhân bản và phát hiện dễ dàng những đoạn gene rất ngắn, khoảng chừng 70-80 bp, điều rất khó thực hiện khi sử dụng PCR-Điện di thông thường (vì khó quan sát trên gel agarose). Tôi từng nhân bản và sử dụng phân tích Melting Curve để phát hiện thành công những đoạn DNA rất nhỏ này từ gene interleukin 28B của người trong đề tài nghiên cứu sinh của mình. Bạn chỉ cần có một chút kiến thức về sinh học phân tử để chọn được những vùng gene có Tm cao dùng cho thiết kế primer thì mọi chuyện sẽ trở nên rất dễ dàng.

  

 7,900 total views,  9 views today

Nguyên Tắc Real Time Pcr

Trước khi hiểu nguyên tắc real time PCR ta cần hiểu PCR là gì

PCR (Polemerase Chain Reaction) là gì

Là phản ứng khuếch đại gen (tạo nhiều bản sao) hay phản ứng chuỗi trùng hợp. Là kỹ thuật sinh học phân tử nhằm khuếch đại một đoạn DNA mà không dùng sinh vật sống. PCR dùng nghiên cứu sinh học, y học phát hiện các bệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoán nhiễm trùng, tách dòng gen, và xác định huyết thống.

Phương pháp căn bản chạy PCR được Kary Mullis phát minh. Ông đoạt giải Nobel về Hóa học năm 1993 chỉ sau 7 năm khi đưa ra ý tưởng. Đó là cách DNA nhân lên nhiều lần qua nhiều chu kỳ sao chép bởi enzyme DNA polymerase.

DNA polymerase có trong sinh vật sống để thực hiện chức năng nhân DNA khi tế bào phân chia. Nó làm việc bằng cách nối với sợi DNA và tạo sợi bổ sung. Theo quy trình PCR gốc Mullis, enzyme phản ứng nhân bản DNA được thực hiện trong ống nghiệm (in vitro). Sợi DNA đôi bị tách thành 2 sợi đơn khi đun nóng ở 96 °C. Khi DNA polymerase bị phá hủy phải bổ sung enzyme sau mỗi giai đoạn nung nóng. Quy trình PCR gốc của Mullis không có hiệu quả cao vì nó mất nhiều thời gian. Nó cần một lượng lớn DNA polymerase, và phải liên tục lưu ý suốt trong quá trình PCR.

Sau đó, quy trình gốc này được phát triển bằng cách dùng DNA-Polymerase lấy từ vi khuẩn thermophilic (ưa nhiệt). DNA polymerase từ sinh vật này là thermostable (ổn định ở nhiệt độ cao). Vì thế khi dùng trong PCR nó không bị phá vỡ khi hỗn hợp nung nóng để tách sợi DNA. Từ đó, không cần phải thêm DNA-polymerase vào mỗi chu kỳ, quá trình sao chép DNA có thể đơn giản và tự động hơn.

Một trong những DNA-polymerase chịu nhiệt đầu tiên được phân lập được từ Thermus aquaticus và được gọi là Taq. Taq polymerase được dùng rộng rãi trong thực nghiệm PCR (5/2004). Nhược điểm của Taq là thỉnh thoảng nó nhầm lẫn trong quá trình sao chép DNA.

Dẫn đến đột biến (sai) trong chuỗi DNA, vì nó thiếu tính sửa sai exonuclease 3′-5′. Các polymerase như Pwo hay Pfu được phân lập từ Archaea. Có cơ chế sửa sai, làm giảm một cách đáng kể số đột biến xảy ra trong chuỗi DNA được sao chép. Sự kết hợp giữa Taq và Pfu cung cấp cả độ tin cậy cao lẫn sự nhân bản chính xác của DNA.

Nguyên tắc Real time PCR là gì

Real-time PCR là kỹ thuật PCR mà kết quả khuếch đại DNA đích hiển thị được ngay sau mỗi chu kỳ nhiệt của phản ứng. Chính vì vậy nên được gọi là real-time.

Real-time PCR khác PCR là không cần thiết phải làm tiếp các thí nghiệm để đọc và phân tích kết quả. Điều này để xác định có sản phẩm khuếch đại đích hay không. Vì kết quả cuối cùng của phản ứng khuếch đại cũng được hiển thị ngay sau khi hoàn tất phản ứng.

Có thể nói real-time PCR là kỹ thuật nhân bản DNA đích trong ống nghiệm thành hàng tỷ bản sao dựa vào các chu kỳ nhiệt. Và kết quả khuếch đại trong ống phản ứng được hiển thị cùng lúc với phản ứng khuếch đại xảy ra để người làm thí nghiệm có thể thấy được.

realtimePCR_basic-đã mở khóa

Khái Quát Về Kỹ Thuật Real Time Pcr Là Gì? Ứng Dụng Chẩn Đoán Bệnh Tôm

1. Giới thiệu kỹ thuật Real time PCR là gì?

Realtime PCR là một kỹ thuật sinh học phân tử được sử dụng trong phòng thí nghiệm dựa trên phản ứng tổng hợp chuỗi (Polymerase chain reaction – PCR), nhằm khuếch đại và cùng lúc xác định được số lượng của phân tử DNA mong muốn. Áp dụng kỹ thuật Realtime PCR người dùng không cần thiết phải thực hiện thao tác điện di sản phẩm PCR trên gel agarose để xác định sản phẩm sau khuếch đại.

Giải đáp xét nghiệm Real time PCR là gì?

Kỹ thuật Real time PCR gồm hai quá trình diễn ra đồng thời: nhân bản DNA bằng phản ứng PCR và đo độ phát huỳnh quang tỷ lệ thuận hoặc nghịch với số đoạn DNA tạo thành.

Thành phần máy Realtime PCR bao gồm:

– Phần luân nhiệt

– Phần quang học

– Phần mềm theo dõi và phân tích kết quả.

Trình tự thực hiện kỹ thuật Realtime PCR được thực hiên trong một máy luân nhiệt như sau:

– Các mẫu ADN được gắn với mồi có chất phát huỳnh quang.

– Các mẫu ADN này sẽ được khuếch đại thông qua phản ứng PCR.

– Máy Realtime PCR sẽ chiếu một chùm sáng kích thích có bước sóng nhất định vào các tube chứa mẫu ADN này.

– Các mẫu ADN gắn mồi huỳnh quang sau khi bị kích thích, sẽ phát ra chùm sáng phát xạ.

– Bộ thu dữ liệu (detector) bên trong máy luân nhiệt sẽ thu nhận và xác định bước sóng của ánh sáng huỳnh quang phát ra từ các phân tử huỳnh quang bị kích hoạt trong mẫu.

– Phần mềm sẽ phân tích và cho kết quả trên màn hình hiển thị

2. Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR trong chẩn đoán bệnh tôm

Sau khi nắm được định nghĩa kỹ thuật Real time PCR là gì chắc hẳn nhiều người nuôi tôm muốn biết đến ứng dụng kỹ thuật Real time PCR trong chẩn đoán bệnh tôm.

Hiện nay, kỹ thuật Realtime PCR được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực như thủy sản, thú y, sinh dược, thực phẩm, nghiên cứu,… Riêng trong lĩnh vực thủy sản, đặc biệt là ngành nuôi tôm công nghiệp đang phải đối mặt với nhiều rủi ro, trong đó, dịch bệnh nguy hiểm trên tôm như bệnh đốm trắng trên tôm, EMS, EHP, IMNV, YHV… đã gây ra thiệt hại kinh tế rất nghiêm trọng. Trước thực trạng trên, kỹ thuật Realtime PCR được đánh giá là công cụ hữu hiệu và được sử dụng phổ biến giúp chẩn đoán sớm và phòng ngừa sự lây lan dịch bệnh. Đồng thời, kỹ thuật Realtime PCR còn giúp kiểm soát tốt mầm bệnh nguồn giống đầu vào và các mặt hàng tôm xuất khẩu theo yêu cầu của các nước nhập khẩu như Úc, Hàn Quốc, EU, Mỹ…

Xét nghiệm Realtime PCR chẩn đoán bệnh tôm chính xác

Việc chẩn đoán bệnh tôm dựa trên kỹ thuật Realtime PCR cần phải có bộ Kit (bộ hóa chất phản ứng) được thiết kế phù hợp với từng đối tượng bệnh. Với nhiều năm kinh nghiệm trên thị trường, GeneReach đã phát triển bộ Kit IQ REAL như một hệ thống chẩn đoán bệnh dựa trên kỹ thuật Realtime PCR cho phép phát hiện sớm, chính xác, nhạy, và đặc hiệu với tác nhân gây bệnh.

Hiện nay, kit IQ REAL được phát triển để phát hiện sớm các bệnh trên tôm như:

– Bệnh đốm trắng trên tôm (WSSV)

– Bệnh hoại tử gan tụy cấp trên tôm (AHPND/EMS)

– Bệnh vi bào tử trùng trên tôm (EHP)

– Bệnh hoại tử cơ trên tôm (IMNV)

– Bệnh còi do virus Monodon baculovirus (MBV)

– Bệnh hoại tử dưới vỏ và cơ quan tạo máu (IHHNV)

– Hội chứng Taura trên tôm (TSV)

– Bệnh đầu vàng trên tôm (YHV)

– Bệnh do vi khuẩn gây hoại tử gan tụy (NHPB).

KIT IQ Real được sử dụng trong kỹ thuật Realtime PCR

Kit IQ REAL được sử dụng cho phòng thí nghiệm Real-time PCR. Ngoài ra, kỹ thuật Real time còn được ứng dụng nhiều trong lĩnh vực vi sinh vật học, trong nghiên cứu, xác định tác nhân gây bệnh ở thực vật, Xác định các sinh vật biến đổi gen, định lượng lâm sàng và kiểm tra kiểu gen, …

Hiện tại các bộ Kit IQ REAL đã được chúng tôi nhập khẩu chính hãng từ IQ REAL với mong muốn đem đến cho người nuôi trồng thủy sản bộ sản phẩm ứng dụng kỹ thuật Real time PCR một các tốt nhất trên thị trường. Liên hệ ngay 19002620 để được tư vấn và báo giá chi tiết về sản phẩm.

Máy Pcr Là Gì? Các Loại Máy Pcr Trong Chăn Nuôi

Máy PCR từ lâu đã được sử dụng phổ biến trong các nghiên cứu sinh học, y học nhằm phát hiện các bệnh do virus, vi khuẩn, chẩn đoán những bệnh nhiễm trùng, tách dòng gene và xác định huyết thống,… Bài viết này HappyVet sẽ cùng quý bạn đọc đi tìm hiểu chi tiết về máy PCR là gì và các loại máy PCR được sử dụng phổ biến trong chăn nuôi.

TỔNG QUAN VỀ MÁY PCR

1. Máy PCR là gì?

Máy PCR (máy luân nhiệt) là thiết bị chẩn đoán bệnh thú y không thể thiếu trong phòng lab sinh học, y tế. PCR là chữ viết tắt của cụm từ Polymerase Chain Reaction – Đây là phương pháp khuếch đại nhanh nhiều bản sao các đoạn DNA mà không qua tạo dòng. Nếu trước đây một thí nghiệm sinh học phân tử phải kéo dài hàng tuần, hàng tháng, thì ngày nay nhờ kỹ thuật PCR ra đời mà các thí nghiệm chỉ thực hiện trong vài ngày, thậm chí trong vài giờ.

Kỹ thuật PCR được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực như chẩn đoán, xét nghiệm các tác nhân vi sinh vật gây bệnh, xác định giới thính của phôi, giải mã di truyền, tạo giống, nghiên cứu sự tiến hóa của sinh vật ở mức độ phân tử, chẩn đoán bệnh do virus, vi khuẩn gây bệnh,…

Nếu như kỹ thuật PCR truyền thống cần phải có giai đoạn phân tích sau khuếch đại thì hiện nay các loại máy PCR real time cho kết quả khuếch đại AND đích được hiển thị sau mỗi chu kỳ phản ứng. Ưu điểm của việc sử dụng PCR real time là không cần phải thực hiện thao tác điện di sản phẩm PCR trên gel agarose nhằm xác định sản phẩm sau khuếch đại.

2. Nguyên lý máy PCR

Nguyên lý hoạt động của máy PCR là việc tổng hợp DNA dựa trên mạch khuôn là một trình tự đích DNA ban đầu, khuếch đại, nhân số lượng bản sao của khuôn này thành hàng triệu bản sao thông qua hoạt động của enzyme polymerase và một cặp mồi đặc hiệu cho đoạn DNA này.

Phản ứng PCR gồm nhiều chu kỳ và được lặp lại nối tiếp nhau, mỗi chu kỳ được diễn ra theo 3 bước:

Bước 1: Biến tính tách đôi sợi DNA: Được thực hiện ở nhiệt độ cao hơn nhiệt độ nóng chảy của phân tử (94 – 95 0 C) trong vòng 30 – 60 giây. Lúc này, phân tử DNA mạch kép sẽ được tách thành hai mạch đơn (đóng vai trò là mạch khuôn cho sự tổng hợp hai mạch bổ sung mới).

Bước 2: Bắt cặp mồi: Được thực hiện ở nhiệt độ thấp hơn so với nhiệt độ nóng chảy (Tm) của các Primer, nhiệt độ dao động trong khoảng 55 – 65 0 C. Thời gian bắt cặp kéo dài từ 30 – 60 giây tùy vào Tm của các primer.

Bước 3: Kéo dài: Được thức hiện ở nhiệt độ 72 0 C giúp cho DNA polymerase có môi trường hoạt động tốt nhất. Lúc này, dưới tác động của DNA polymerase, các nucleotide sẽ lần lượt gắn vào primer theo nguyên tắc bổ sung với mạch khuôn. Thời gian kéo dài khoảng 30 giây đến vài phút tùy thuộc vào độ dài của trình tự DNA khuếch đại.

Qua 3 bước, một DNA đích sẽ được nhân lên thành hai bản sao và chu kỳ được lặp đi lặp lại liên tục từ 30 – 40 chu kỳ. Lúc này, từ một DNA đích sẽ nhân lên thành 2 30 đến 2 40 bản sao, tức là hàng tỷ bản sao.

3. Cấu tạo máy PCR

Mỗi loại máy PCR lại có cấu tạo khác nhau. Bạn có thể lựa chọn PCR với 2 hoặc 3 block hoặc block thông thường 96 giếng, hoặc cũng có thể lựa chọn các loại máy PCR cầm tay để đem đi hiện trường. Ở nhiều trung tâm nghiên cứu hay bệnh viện lớn họ thường xây dựng series nhiều máy luân nhiệt được liên kết với nhau để tạo ra một hệ thống máy PCR lớn và được điểu khiển bởi một hệ thống máy tính trung tâm hiện đại.

ƯU ĐIỂM CỦA MÁY PCR

Kỹ thuật PCR đem đến nhiều ưu điểm vượt trội hơn hẳn so với các xét nghiệm thông thường khác như:

Kết quả thu được chính xác trong vài giờ.

Phát hiện được các virus, vi khuẩn gây bệnh.

Cho phép xác định được các tác nhân vi sinh không thể nuôi cấy trong phòng thí nghiệm lâm sàng vì khả năng dịch cao hay khó nuôi cấy.

Phát hiện sớm các đột biến gen gây ung thư, bệnh di truyền,…

Xác định huyết thống giữa các cá thể khác nhau.

CÁC LOẠI MÁY PCR TRONG CHĂN NUÔI

Hiện nay, kỹ thuật PCR được sử dụng phổ biến trong việc chẩn đoán bệnh trên gia súc, gia cầm, thủy sản,… nhằm phát hiện sớm và đưa ra hướng điều trị hiệu quả.

Kỹ thuật PCR có thể chẩn đoán được hầu hết các bệnh nguy hiểm trên vật nuôi:

Bệnh trên lợn: Dịch tả lợn Châu Phi, dịch tả lợn cổ điển, giả dại, đóng dấu lợn,…

Bệnh trên gia cầm: CRD, Marek, Leucosis, Newcastle,…

Bệnh trên bò: Bò điên, tụ huyết trùng trâu bò, tiêu chảy do virus trên bò,…

Bệnh trên chó: Parvo, Care, bệnh lỵ do Giardia intestinalis,….

Bệnh trên tôm: Vi bào tử trùng, đốm trắng, Taura, hoại tử gan tụy,…

HappyVet giới thiệu cho người nuôi hệ thống máy PCR Pockit được thiết kế linh hoạt, cho phép đồng thời chẩn đoán được nhiều bệnh trong một lần chạy mẫu, cho kết quả trong vài giờ đồng hồ.

1. Máy Pockit Central

Pockit Central là thiết bị PCR được sử dụng trong phòng thí nghiệm. Máy được tích hợp đồng thời hệ thống ly trích Acid Nucleic và phản ứng iiPCR giúp rút ngắn thời gian chẩn đoán mầm bệnh. Thao tác thực hiện đơn giản, chỉ cần đưa mẫu vào máy và bấm nút và chờ kết quả.

2. Máy Pockit Xpress

Pockit Xpress là một trong những loại máy PCR đang được rất nhiều bà con lựa chọn. Sản phẩm được thiết kế như một phòng thí nghiệm thu nhỏ, toàn bộ hệ thống chẩn đoán được đặt trong một chiếc vali xách tay vận chuyễn dễ dàng đến các trang trại, các cửa khẩu hay các vùng dịch, giúp phát hiện nhanh mầm bệnh.

Hệ thống PCR được thiết kế linh hoạt, một chương trình có thể ứng dụng cho tất cả các chỉ tiêu và cho phép chẩn đoán được nhiều bệnh trong một lần chạy mẫu.

3. Máy Pockit Pro

Pockit Pro cũng được vận hành dựa trên phương pháp iiPCR, cho kết quả nhanh chóng trên màn hình LCD và tự động lưu vào thẻ SD. Sản phẩm được thiết kế linh hoạt, một chương trình có thể ứng dụng cho tất cả các chỉ tiêu, đồng thời cho phép chẩn đoán nhiều bệnh chỉ trong một lần chạy mẫu.

4. Máy Pockit micro

Pockit micro là một trong những dòng thế hệ mới của phương pháp iiPCR với độ nhạy cao, cho kết quả chính xác, thiết kế dạng cầm tay và dễ dàng đọc kết quả âm tính hoặc dương tính trên màn hình.

Số mẫu: 1 – 4 mẫu/ lần

Thời gian: 30 phút

Khối lượng: 380g

5. Máy Pcokit micro Plus

Máy pcr cầm tay Pockit micro Plus cũng là thế hệ mới nhất của phương pháp iiPCR với nhiều cải tiến trong thiết kế như trọng lượng nhẹ, pin sạc tích hợp, dễ dàng sử dụng và có thể vận hành ở mọi nơi và mọi thời điểm.

Hình ảnh máy PCR cầm tay Pockit micro Plus

6. Máy Pockit micro Duo

Micro Duo là dòng sản phẩm mới nhất của series máy phân tích cầm tay Pockit Micro với hai bước sóng chẩn đoán 520nm, 550nm. Sản phẩm có khả năng chẩn đoán chính xác mầm bệnh do virus, vi khuẩn gây ra trên thú y.

Bạn đang xem bài viết Hô Biến Pcr Thành Real trên website Sansangdethanhcong.com. Hy vọng những thông tin mà chúng tôi đã chia sẻ là hữu ích với bạn. Nếu nội dung hay, ý nghĩa bạn hãy chia sẻ với bạn bè của mình và luôn theo dõi, ủng hộ chúng tôi để cập nhật những thông tin mới nhất. Chúc bạn một ngày tốt lành!